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          細胞轉染

          產品介紹

          細胞轉染是將外源分子如DNA, RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。

          因為不同的細胞在生理代謝及分裂上均存在差異,因此研究者將外源遺傳物質導, 入細胞的過程中需要選擇
          不同的方式。目前,將外源物質導入細胞的方法主要分為三大類:
          1、脂質體(或是脂質體替代物)轉染;
          2、電轉;
          3、病毒感染。
          這三種方法互有優劣。脂質體或是脂質體替代物轉染操作簡便,價格低廉, 但是對細胞毒性大。而且,有
          些細胞通過脂質體轉染效率很低,電轉操作方便快捷,但是需要專門的儀器,對細胞損傷也比較大;病毒
          感染克服了前兩者的劣勢,感染效率高,對細胞毒性小,但是病毒前期包裝需更大量的時間和精力。
          實驗操作流程:
          1.轉染試劑的準備
          a.將400u去核酸酶水加入管中,靂蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
          b.震蕩后將試劑放在- 20攝氏度保存,使用前還需需蕩。
          2。選擇合適的混合比例(1: 1-1: 2脂質體[1體積: DNA質量來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體
          積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的ONA,電蕩后在加入合適體積的轉染試劑,再次震
          蕩。
          3、將混合液在室溫放置10-15分鐘。
          4、吸去培養板中的培養基,用PBS或者無血清培養基清洗- -次。
          5、加入混合液,將細胞放回培養箱中培養-個小時。
          6.到時后,根據細胞種類決定是否移除混合液,之后加入完全培養基繼續培養24- 48小時。
           

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