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          細胞生長曲線的測定

          產品介紹

          [細胞生長曲線的測定實驗目的]掌握繪制細胞生長曲線的原理和方法。

          [細胞生長曲線的測定背景與原理]

          生長曲線是則定細胞生長數的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是培養細胞生物學特性的基本參數之一。一 般細胞傳代之后,經過短暫的懸浮后貼壁,隨后渡過長短不同的潛伏期,即進入快速生長的指數生長期。在細胞達到飽和密度后,停止生長,進入平臺期,然后退化衰亡。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化,需連續對細胞進行計數。通常計數6天。一般每次實驗設3個平行重復。

          [材料、試劑與儀器]

          1、實驗材料:

          Hela細胞系。

          2、實驗試劑:

          DMEM培養基(青霉素,鏈霉素,10%血清),0.25%胰蛋白酶溶液,臺酚藍染液。

          3、實驗儀器:

          超凈工作臺,cO2培養箱,倒置顯微鏡,微量移液器,血細胞計數板,培養瓶,高心管,移液管,廢液缸,蓋玻片,24孔板。

          [方法與步驟]

          1、取生長良好的細胞,用培養基制成細胞懸液后計數。根據細胞計數結果按5x104mL作傳代培養接種于24孔板中,共接種21孔細胞。1 ml孔。余下三孔可設傳代培養的對照。

          2、24h后每天記錄細胞數目,每次取3孔細胞,分別進行計數。計算平均值。連續計數7d。細胞用胰酶消化后加入一一定量的培養基,混勻制成細胞懸液。取少量懸液與臺酚藍11混合。取一-干凈的血細胞計數板,蓋上蓋片,從蓋片兩邊滴入細胞懸液使之充滿計數板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡,也不能太多,否則會使蓋片浮起而使細胞計數不準。

          3、低倍鏡下觀察,活細胞不著色,臺盼藍著色的細胞呈深藍色,是不健康或已死亡的細胞,不能計數。找出計數板上的方格,計算四角大格內總細胞數,壓大格線者只計左側和上方,不計右側和下方細胞懸液中細胞密度計算公式為:細胞數1(L= (四角大格內細胞數/4) x104x2

          4、根據細胞計數結果,以單位細胞數(細胞數mL)為縱坐標,以時間為橫坐標繪制生長曲線。
           

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