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          細胞平板克隆形成實驗

          產品介紹

          平板克隆形實驗步驟

          1、細胞懸液制備:取對數生長期的單層培養細胞,用0. 25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,離后用完全培養基重懸,制成細胞懸液。

          2、細胞種板:將細胞懸液作梯度倍數稀釋,以每皿50、100、 200、 500、1000、 2000個細胞的梯度密度分別接種含1 ml 37 C預熱培養液的皿中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37 C 5% Co2的環境下,靜置培養。

          3、細胞觀察:顯微鏡下觀察到單個細胞長到20個以上細胞克隆,培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去.上清液,用PBS小心浸洗2次。加純甲醇1ml,固定15分鐘。然后去固定液,加適量Giemsa應用染色液染10分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥,手記拍照采集圖像。

          4、克隆計數:用肉眼直接計數克隆數,后計算克隆形成率。

          結果分析

          平板克隆克隆形成率=克隆數接種細胞數x100%

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