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          產品中心

          細胞周期檢測服務

          產品介紹

          實驗共分以下4個主要步驟:

          1.細胞鋪盤

          HeLa S3細胞,密度為80%左右分盤,使鋪盤密度在50%左右, 為滿足流式細胞儀上機要求,細胞數目需大于1x10組。2.細胞同步化處理:

          a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

          b)用溫育的PBS洗4次,更換新鮮培養基,培養9h

          c)再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

          3.樣品收集;

          a)分別收取釋放2h(S期),6h(G2/M期)和12h(G1期)細胞樣品

          b)每個樣品收取都使用預冷的PBS洗滌4次,1000g離心5min, 棄上清

          c) 100uL PBS重懸沉淀,吸取出細胞懸液于移液器中,于移去細胞的管中加入900μl預冷的70%乙醇,旋渦振蕩器震蕩中滴入細胞懸液。

          d) 4C固定一小時或更 長時間。

          e) 1500rmp,離心10min,去固定液。

          f)細胞染色液配制: 50xRNase A母液: 50xPI母液: PBS=20: 20: 960; RNase A母液濃度1mg/mL,工作濃度20μg/mL; PI母液濃度2.5mg/mL, 工作濃度50μg/mL 。

          g)細胞37度染色1h。根據細胞童,加入一定體積的細胞染色液(1~1.5mL) 重懸,使上機時細胞通過率為

          200~350Cl/s,,染色液不可過多或過少,過多則細胞密度過低上機速度嚴重不足,過少則導致細胞粘結。

          h) 300目篩網過濾至流式管中。

          4.上機檢測;

          流式細胞儀上機檢測,計數50000個細胞。

          5.同步化數據分析

          數據使用ModFit軟件分析。

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