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          上海甲基化檢測實驗

          產品介紹

          上海甲基化檢測實驗

           

          上海甲基化檢測實驗服務項目 

          1、甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

          用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。

          2、亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

          用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR,在擴增過程中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶,后對PCR產物進行測序就可以判斷CpG位點是否發生甲基化稱為BSP-直接測序方法。將PCR產物克隆至載體后進行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測序法。

          3、甲基化敏感擴增多態性(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)

          MSAP是利用對DNA甲基化敏感的兩種同裂酶Hpa II和Msp I來對基因組DNA進行酶切和連接。由于兩種酶能夠識別相同的限制性酶切位點,即CCGG位點。當DNA序列中的CCGG位點出現不同程度的甲基化狀態時,會分別被這兩種酶識別,以有無產物的方式體現出來。

          4、焦磷酸測序(Pyrosequencing)

          通過準確定量單個連續的CpG 位點上的甲基化頻率,焦磷酸測序能檢測并定量甲基化水平上的細微改變。在序列延伸過程中,根據C和T的摻入量來定量確定單個位點的C-T比例。因此,不同位點的甲基化變異就能被準確檢測。由于焦磷酸測序提供了真實的序列數據,甲基化狀態也就以序列形式呈現。

          送樣要求

          細胞(≥106個)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基因組DNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。

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