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          上海ncRNA測序實驗

          產品介紹

          上海ncRNA測序實驗 

          長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)是指長度在200~100000 nt之間不具有蛋白編碼功能的RNA分子。 它們存在帶polyA尾和不帶polyA尾兩種形式, 具有跨物種的低保守性,組織特異性表達和豐度低等特點。lncRNA的種類遠遠超過編碼RNA,保守估計哺乳動物基因組序列中4%~9%的序列產生lncRNA轉錄本, 而相應的蛋白編碼RNA的比例僅是1%~5%。目前研究提示lncRNA的功能機制主要包括參與轉錄調控、轉錄后調控、蛋白質運輸和mRNA降解。lncRNA已經成為非編碼RNA研究領域的一個熱點,借助高通量測序,研究人員能夠快速獲得與疾病或者特定生物學過程相關的lncRNA并進行深入研究。

          實驗技術路線: 

          數據分析技術路線: 

          http://www.genenergy.cn/upload/2013/8/15162516980.jpg

          部分結果展示


          新lncRNA預測結果(上海ncRNA測序實驗  

          lncRNA-mRNA調控網絡

          樣品要求 
          1)樣品類型:細胞、新鮮組織或RNA樣品。 
          2)樣品量:細胞樣品請提供至少1×107個細胞,組織樣品請提供至少300mg的組織塊或切片,RNA樣品請提供10 μg以上的總RNA。 
          3)樣品質量:RNA無明顯降解,提取的總RNA OD260/280值在1.8~2.2之間,濃度≥ 500 ng/μl,28S:18S ≥ 1.5,RIN ≥7。 
          4)樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊(切成~50mg的小塊)可用TRIZOL或RNA保護劑處理或液氮凍存后,-80℃保存。RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存。樣品保存期間避免反復凍融。 
          5)樣品運輸:樣品置于1.5 ml管中,封口膜封好,干冰運輸。

          參考文獻 
          [1] The GENCODE v7 catalog of human long noncoding RNAs: Analysis of their gene structure, evolution, and expression. Genome Res. 2012 22: 1775-1789.
          [2] A long noncoding RNA regulates photoperiod-sensitive male sterility, an essential component of hybrid rice. PNAS, 2012, 109:2654-2659

          應用案例 
          Long Noncoding RNAs with snoRNA Ends . Molecular Cell, 2012, 48:219230
                 利用NGS方法發現:一類雙末端都含有小核仁RNA(snoRNA)的內含子序列在剪接發生過程中可以形成一類新型長非編碼RNA,命名為sno-lncRNAs。在人類疾病Prader-Willi syndrome緊密關聯區域存在五個sno-lncRNAs,它們在人源胚胎干細胞中表達量極高,且異常穩定。功能研究表明,這些sno-lncRNAs加工成熟后均聚集于其轉錄位點附近,形成一種全新的細胞核亞定位;它們同時還含有多個剪接調控因子Fox2蛋白的特異結合位點,從而可以像“海綿”一樣吸附細胞核內的Fox2,調節Fox2在細胞核內的分布,進而影響Fox2對特異 mRNA底物的選擇性剪接調控。這些sno-lncRNAs在PWS綜合癥病人中缺失,從而提示這些新的RNA分子可能與PWS綜合癥的病理發生相關。

          研究結果 
          1. 利用RNA測序發現候選的sno-lncRNA,并進行驗證確認 。


          2. 通過后續試驗結果發現sno-lncRNA的調控機制。 

           

                                                                           

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