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          免疫熒光染色實驗

          產品介紹

                          免疫熒光染色實驗
          免疫熒光是標記免疫技術發展早的一種,它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,通過將抗體與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。

          1、細胞固定和通透

          為達到佳的檢測效果,細胞需要經過固定和通透。這些步驟非常關鍵,細胞和抗原需要佳的結構,并利于抗體與抗原結合。通常情況下,需要通過以下步驟得以實現:細胞用2%-4%多聚甲醛固定,之后用0.1%皂角苷或0.02%的Triton X-100進行通透。前者是比較溫柔的處理,但是對于核內抗原可能無效,需要用到Triton。使用皂角苷進行通透時,要注意它會引起細胞膜的可逆性通透,也就是除了在通透初期,在每個抗體孵育環節都需要進行通透。另外,細胞可以用冰甲醇進行同時固定和通透,可以避免去垢劑的使用。

          2、抗體特異性

          免疫熒光需要用到特異性非常強的抗體,可以避免高背景和不理想的蛋白定位結果。在大多數情況下,純化抗體的效果很好,但是正確的對照可以幫助定位抗原。使用只有二抗染色的片子作為陰性對照,有利于減少降低背景干擾。

          3、合適的抗體稀釋比例

          通過優化抗體稀釋比例來優化染色,通常情況下1ug/ml的純化抗體或者1:100-1:1000的抗血清足夠達到特異性染色的結果。但在能低背景染色的前提下,可以通過增加濃度來提高信號強度。如果是*次使用該抗體或測定某抗原,強烈建議濃度梯度實驗。

          4、優化緩沖液和封閉劑

          盡管很多抗原在常見的Buffer如PBS中可以很好的被染色,但是對于某些目的抗原,更換一下含有不同離子的緩沖液,比如鈣、鎂、鉀等,可以帶來很大程度上的改善。Rockland可提供優化過的IHC用封閉緩沖液,同樣適用于熒光染色實驗。

          5、選擇正確的二抗

          如果您需要做免疫實驗,我們強烈建議您選擇進行過預吸附的二抗進行單染實驗;如果是雙重甚至是多重染色,那么使用預吸附的二抗。同時,請優先選擇來自同一物種的二抗

           

          免疫熒光染色實驗客戶提供

          細胞株或細胞爬片。注:細胞爬片不宜太密;細胞固定。組織切片,一抗

          公司提供

          基本實驗步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析,熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝

          實驗周期:1-3周

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